Alfa-synuklein utgör cirka 1% av alla proteiner i det centrala nervsystemet och består av 140 aminosyror varav 12 är viktiga för aggregation. I ett tidigt sjukdomsskede kan en ansamling av alfa-synuklein vara ett kännetecknen på Parkinsons sjukdom (PD). Tetrazolium salt (WST-8) är ett ämne som omvandlas till formazan via dehydrogenasaktivitet i levande celler, varefter formazan sedan kan mätas spektrofotometriskt som en orange färg. Syftet med arbetet var att använda ett CCK-8 kit för att mäta total dehydrogenasaktivitet för SH-SY5Y-celler som behandlats med peptidfibriller med koppling till PD. Cellräkning och optimering av cellantal utfördes med koncentrationer från 1,000- till 50,000 SH-SY5Y-celler/brunn via odling på sterila 96-hålsplattor med inkubering i antingen 24 eller 48 timmar. Utifrån resultaten som erhölls behandlades celler med H2O2 i koncentrationer från 1000- till 4 µM och resultaten plottades som en standardkurva över cytotoxicitet. Efter funnet cellantalsoptimum utfördes viabilitetstest med tillsats av väteperoxid och sedan peptidfibriller. Resultaten visade en optimal inkubationstid på 24 timmar innan behandling, 24 timmar med ett cytotoxiskt ämne och sist en inkubation med WST-8 i 2 timmar med avseende på ökande absorbans. Behandling med H2O2 visade på cytotoxicitet vid ökande koncentrationer men behandling med peptidfibriller gav ingen sänkning i cellernas viabilitet. Cellerna behandlades och gav tydliga resultat om att ingen cytotoxicitet fanns efter 24 timmars behandling med peptiderna. Detta resultat är något som förväntades utifrån flera faktorer runt fibrillformationen och tidigare studier. Utifrån resultaten kan det vara av intresse att behandla celler upp till 72 timmar för att se någon effekt i vidare studier.

Alpha-synuclein stands for approximately 1% of all proteins in the central nervous system and consists of 140 amino acids, and 12 of them are crucial for aggregation. Parkinson’s disease (PD) is characterized by accumulation of alpha-synuclein in certain parts of the brain. Tetrazolium salt (WST-8) is a substance that is converted to formazan through dehydrogenase activity in living cells, after which formazan can be spectrophotometrically measured as an orange colour. The purpose of this study was to measure dehydrogenase activity in SH-SY5Y cells treated with peptide fibrils associated with PD. Cell counting and optimization was performed with concentrations from 1,000 to 50,000 cells/well through cultivation 24 or 48 hours. Cells were treated with H2O2 at concentrations from 1,000 to 4 µM, and the results were plotted as a standard curve for cytotoxicity. After finding the optimal cell count, viability tests were done with the addition of H2O2 and then peptide fibrils. The results showed an optimal incubation time of 24 hours before a 24-hour treatment with a cytotoxic substance, followed by an incubation with WST-8 for 2 hours. Treatment with H2O2 resulted in a sigmoidal curve indicating cytotoxicity at increasing concentrations. Treatment with peptide fibrils did not decrease cell viability. The treated cells yielded clear results indicating no cytotoxicity after 24 hours of peptide treatment. This result was expected because these aggregational-prone peptides might induce cell toxicity over longer times. Based on these results, it may be of interest to treat cells for 72 hours in future studies.