lnu.sePublications
Change search
CiteExportLink to record
Permanent link

Direct link
Cite
Citation style
  • apa
  • harvard1
  • ieee
  • modern-language-association-8th-edition
  • vancouver
  • Other style
More styles
Language
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Other locale
More languages
Output format
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf
Mutationers effekt på bindningsinteraktionen mellan PD-1 och PD-L1
Linnaeus University, Faculty of Health and Life Sciences, Department of Biology and Environmental Science.
2016 (Swedish)Independent thesis Basic level (degree of Bachelor), 10 credits / 15 HE creditsStudent thesis
Abstract [sv]

Immunsystemet, som är mycket komplext byggs upp av ett flertal olika delar med ett omfattande kontrollsystem. En viktig del inom immunförsvaret är de olika kontrollpunkter som reglerar systemet. Receptorn programmed death 1 (PD-1) är ett exempel på en sådan inhibitorisk kontrollpunkt som reglerar självtolerans hos T-celler. T-celler, som är de immunceller som agerar mot intracellulära mikrober måste interagera med egna celler för att känna igen mikroberna. Denna process behöver därför regleras för att förhindra att T-cellerna blir självreaktiva. När PD-1 binder till sin ligand, programmed death ligand 1 (PD-L1) minskar därför aktiviteten av T-cellerna. Detta har gjort att cancerceller ofta utnyttjar dessa proteiner för att undkomma immunsystemet. På grund av proteinernas roll i utvecklandet av cancer är det av intresse att undersöka hur mutationer påverkar deras bindningsinteraktion. Tre aminosyror, Glu58, Met115 och Asp122 på humant PD-L1 ersattes därför med alanin, vilket resulterade i tre olika mutationer. För att uttrycka proteinerna och undersöka bindningen mellan hPD-1 och hPD-L1 användes bakterie- respektive jästsystem, samt ett flertal olika molekylärbiologiska metoder som exempelvis transformering, yeast surface display samt flödescytometri. Resultatet visade att bindningsinteraktionen mellan hPD-1 och hPD-L1 var väldigt svag vilket kan orsakats av att hPD-1 troligtvis inte veckats korrekt. De tre muterade proteinerna uppvisade generellt sett svårigheter med att uttryckas på jästcellernas yta samt att binda till hPD-1. För att förbättra signalen för bindningen mellan hPD-1 och hPD-L1 är ett alternativ att försöka få fram ett helt rent och korrekt veckat hPD-1. Detta exempelvis genom att rena fram hPD-1 från inklussionskroppar. 

Abstract [en]

The immune system consist of two important parts, the innate and adaptive immune system, that together form a very complex network with multiple regulatory restrictions. One important part of the control system are different checkpoints which keep the immune respons under control. Programmed death 1 (PD-1) is an example of an inhibitory immune checkpoint that regulates the self-tolerance to T-cells. The T-cells act against intracellular microbs and interact with own cells, it is therefore necessary to regulate this process. When PD-1 binds to its ligand, programmed death ligand 1 (PD-L1), the activity of the T-cells is reduced. Cancer cells take often advantage and manipulate PD-1/PD-L1 interactions to escape the control of the immune response. Because of their part in development of cancer it is of interest to investigate the effect of different binding-interface mutations on the complex formation. Three human PD-L1 amino acids mutations are thus assessed, where Glu58, Met115 and Asp122 were changed to alanine. To express the proteins and investigate the binding between hPD-1 and hPD-L1 were bacterial and yeast systems used together with different molecular biological methods, for example transformation, yeast surface display, and flow cytometry. The results showed that the binding interaction between PD-1 and PD-L1 was very weak; the problem behind this weak interaction could be that the PD-1 has not folded correctly. The three mutated proteins showed in general low expression on the surface of the yeast cells and binding to PD-1. In future, to increase the binding signal between the proteins one  alternative is to obtain higher purity PD-1, for example by purification from inclusion bodies. 

Place, publisher, year, edition, pages
2016. , 25 p.
National Category
Biological Sciences
Identifiers
URN: urn:nbn:se:lnu:diva-53606OAI: oai:DiVA.org:lnu-53606DiVA: diva2:937909
Subject / course
Biology
Educational program
Biology Programme, 180 credits
Supervisors
Examiners
Available from: 2016-06-16 Created: 2016-06-16 Last updated: 2016-06-16Bibliographically approved

Open Access in DiVA

No full text

Search in DiVA

By author/editor
Malmberg, Emma
By organisation
Department of Biology and Environmental Science
Biological Sciences

Search outside of DiVA

GoogleGoogle Scholar

Total: 30 hits
CiteExportLink to record
Permanent link

Direct link
Cite
Citation style
  • apa
  • harvard1
  • ieee
  • modern-language-association-8th-edition
  • vancouver
  • Other style
More styles
Language
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Other locale
More languages
Output format
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf