SH-SY5Y är en adherent neuroblastom-cellinje som används för in vitro-studier relaterade till Parkinsons sjukdom. För att studera cellviabilitet, och därmed kunna dra slutsatser om behandlingseffekter, används färguteslutningstester med trypanblått tillsammans med cellräkning. Trots att det blir vanligare att cellviabilitet bestäms med hjälp av automatisk cellräkning saknas en noggrann kartläggning av de optimala förhållandena för denna typ av studier av SH-SY5Y-celler.

Syftet var därför att undersöka användarbarheten hos den automatiska cellräknaren LUNA-II för att analysera cellantal och viabilitet hos SH-SY5-celler. Utöver detta syfte, och för att därmed undersöka om automatisk cellräkning även fungerar för komplexa och grumliga prover, var ytterligare fokus att studera hur två fibrill-typer med relevans till Parkinsons sjukdom påverkade viabiliteten hos SH-SY5Y-celler. Inledningsvis analyserades SH-SY5Y i cellsuspension för att studera de optimala analysförhållandena med LUNA-II. Därefter analyserades adherenta celler efter tre olika tillväxttider. Ytterligare optimeringsförsök genomfördes med väteperoxid, en substans som inducerar oxidativ stress i celler.

Optimeringsresultaten visade att lägre cellkoncentrationer, ≤1,2x10⁵celler/ml, gav opålitliga viabilitetsvärden på grund av det låga cellantalet som analyserades. Väteperoxidbehandlingen (1000-1μM) i 24 timmar gav en dosresponskurva med ett uppskattad EC₅₀ på 300μM. Slutsatsen var att LUNA-II kan användas för att studera SH-SY5Y-celler men att det finns begräsningar med metoden. Till exempel krävs en analyskoncentration kring 5x10⁵celler/ml och metoden är känslig för cellaggregat i provmaterialet. Slutligen påvisades ingen cytotoxisk effekt på SH-SY5Y-celler efter exponering av fibriller. Ytterligare in vitro-studier krävs för att kunna dra slutsatser om fibrillernas faktiska påverkan på SH-SY5Y-celler, troligtvis med kompletterande analyser och längre inkubationstider än det som användes i denna studie. 

SH-SY5Y is an adherent neuroblastoma cell line used in Parkinson’s disease-related in vitro studies. Trypan blue, combined with an automatic cell counter, is commonly used to study cell viability. However, there is a lack of accurate information on optimal conditions for studying SH-SY5Y cells using automatic cell counters.

The aim was, therefore, to examine the usability of LUNA-II, an automatic cell counter, for analyzing cell count and viability of SH-SY5Y cells. Additionally, the study aimed to investigate the impact of two fibrils relevant to Parkinson’s disease on SH-SY5Y cell viability. Initially, cells in suspension were analyzed to determine the optimal analysis conditions using LUNA-II. Then adherent cells were analyzed after being cultured for 15 minutes, 24 and 48 hours. In addition, treatment with hydrogen peroxide a known toxic substance, was performed. 

Method optimization revealed that a lower cell concentration, ≤1,2x10⁵cells/ml, led to unreliable viability measurement due to the limited number of cells analyzed. Hydrogen peroxide treatment (1000- 1μM) for 24 hours resulted in a dose-response curve with an estimated EC₅₀ of 300μM. In conclusion, LUNA-II can be used for studying SH-SY5Y cells, but certain limitations must be considered. A cell concentration of approximately 5x10⁵cells/ml is required, and the method is sensitive to cell clumps. Finally, exposure to fibrils did not exhibit any cytotoxic effect on SH-SY5Y. To conclude the actual effect of these fibrils on SH-SY5Y cells, further in vitro studies with longer exposure times and additional assays beyond LUNA-II are necessary.